桉树组织培养,桉树:桃金娘科桉树属植物的总称,速生丰产的优良造纸用材树种,在华南地区大力推广种植。
1. 外植体的消毒处理
晴天午后,剪取经选优良植株基部的萌芽条为外植体。外植体经剪除叶片后,剪成带1~2个腋芽的茎段,置流水中冲洗一段时间,经无菌水清洗3遍后在无菌条件下进行以下操作:(1)用75%酒精消毒30-60 s,用无菌水冲洗2-5遍;(2)用0·1%Hgcl2溶液振荡浸泡5min,用无菌水冲洗3遍; (3)再用0·1%Hgcl2溶液静置浸泡3min,用无菌水冲洗5~6遍。
2.外植体的诱导
在无菌条件下,沥干消毒好的外植体,然后斜插于MS培养基中(注意不要将腋芽埋入培养基,置于28±2℃培养室中培养,每天光照10 h左右,光照强度2 000Lx。培养15天后,剔除污染的材料,将获得的无菌材料转入诱导芽培养基上培养。芽的诱导培养基为MS+6 -BA0·3mg·L-1+NAA0·1 mg·L-1+糖30g·L-1+琼脂7g·L-1。其pH值为5·8。
3. 芽的继代增殖培养
在组培工厂化育苗中,外植体不定芽的增殖率是一个主要经济指标。最优的芽增殖培养基,是提高芽增殖率的关键。因此,在诱导形成芽丛后,即可进行芽的增殖培养基筛选试验。以确定各桉树优良无性系的最优芽增殖培养,可采用正交试验设计作筛选芽增殖培养基的试验。
4. 生根培养
用添加了NAA的1/2MS培养基作为生根培养基。
5. 炼苗与移栽
将生根的试管苗移到遮荫度为50%的自然条件下炼苗15~20天,取出试管苗,用自来水冲洗干净基部的培养基,放入0·1~0·5 g·L-1的高锰酸钾溶液中浸泡1~3 min,再用自来水冲洗一遍,盖上湿毛巾保湿以备移栽。在试管苗移栽至营养袋前,先用3~5 g·L-1的高锰酸钾溶液消毒装有基质的营养袋,再将清洗后的试管苗直接移栽到营养袋中。移栽后及时淋透定根水,并盖上塑料薄膜。一周后逐渐打开塑料薄膜,同时注意温湿度的控制。以此移栽成活率可达90%以上。当营养袋中的小苗长至15 cm即可出圃上山造林或培植为采穗母株。
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